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细胞培养的具体步骤是什么?

提供者:上海威正翔禹生物科技有限公司   发布时间:2022/1/4 12:01:53  阅读次数:156次   进入该公司店铺

 细胞培养技术指的是细胞在体外条件下的生长,在培养的过程中细胞不再形成组织(动物)。培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中,由于环境的改变,细胞的移动或受一些其他因素的影响,培养时间加长,传代导致细胞出现单一化型。

一、细胞复苏

将冻存细2113胞从液氮5261中取出后,在37℃水浴锅内不断摇动促进其融4102化。移人15ml离心管中,加入10ml预热1653的DMEM完quan培养基,轻轻吹匀,离心,2000rpmX2min,弃上清液。

加入10mlDMEM培养基清洗,弃上清液。加入10mlDMEM完quan培养基,轻轻吹打,接种于10cm盘中,在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

二、细胞传代

细胞密度达到80%~90%时.去培养基,10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加人1mlDMEM完quan培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。

加入10mlPBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。再加入10mlPBS(经高压灭菌,保存于40C),吹匀,吸取10微升进行计数,按照1×106/盘接种,在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

三、细胞冻存

细胞密度达到80%~90%时,去培养基,10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完quan培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。加入10mlPBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。

加入lml冻存液(90%血清,10%DMSO),放入冻存盒内(盒内有异丙醇,以bao温度降低的速度),立即放入一80℃冰箱内,过夜,第二天放入液氮中,可以保存至少两年,如不放人液氮,可以保存三个月。

冻存液的配制:70%的完quan培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。

细胞培养的具体步骤是什么?

 

科研实验中,细胞的体外培养一直是一个重要环节。细胞要养好,就要用好血清,如Ausbian®特胎牛血清,它适合各种细胞培养,尤其适合难养细胞,如:干细胞、肝细胞,神经细胞,原代培养、细胞融合、转染细胞等。

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